Kõrgsurvevedelikkromatograafia: erinevus redaktsioonide vahel
Eemaldatud sisu Lisatud sisu
P Kromatograafia detektor |
P Korrastasin skripti abil viiteid |
||
27. rida:
'''Kõrgsurvevedelikkromatograafia''' ehk kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (''high-performance liquid chromatography'', HPLC) on [[kromatograafia|kromatograafiline]] meetod, kus kasutatakse [[statsionaarne faas|statsionaarse faasina]] kromatograafilise kolonni tahket peeneteralist täidist ning [[liikuv faas|liikuva faasina]] vedelikku ehk [[eluent]]i. Peeneteraline täidis põhjustab suurt takistust ning seetõttu kasutatakse eluendi kolonnist läbivoolutamiseks kõrgsurvepumpa.
Üks kõrgefektiivse vedelikkromatograafi tähtsamaid parameetreid on kolonni [[lahutusvõime]]. Mida pikem on kolonn ja peeneteralisem selle täidis, seda suurem on kolonni lahutusvõime, kuid seda kõrgem peab olema ka eluendile avaldatav surve. Tavalises kõrgefektiivses vedelikkromatograafias kasutatakse umbes 250–300 [[Baar(ühik)|baari]] suurust rõhku ning täidise terade suurus jääb vahemikku 3–5 μm. Uuemad kõrgsurvevedelikkromatograafid (nimetatakse ka ''ultra-performance liquid chromatography'', UPLC) võimaldavad lahutada komponente veelgi efektiivsemalt, kasutades väga peenete teradega täidiseid (1–2 μm) ja kõrgemat survet (kuni 1000 baari). Mõlemat tüüpi seadmeid kasutatakse selleks, et uurida nii kvantitatiivselt kui ka kvalitatiivselt segu koostisosasid ([[kromatograafiline analüüs]]), ning nende kolonni sisediameeter on umbes 4,6 mm (UPLC puhul väiksem).<ref name="Niessner, 2017"
Kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat kasutatakse ka uuritava [[keemiline ühend|ühendi]] lahutamiseks teistest segu koostisosadest, et ühendit teatud hulgal koguda ([[preparatiivne kromatograafia]]). Sellisel juhul on täidise terad suuremad (üle 10 μm) ning kolonnide läbimõõt vähemalt kaks korda suurem (sisediameeter üle 10 mm).<ref name="BHRfe" />
[http://www.chromatographyonline.com/introduction-preparative-hplc-0 Chromatographyonline preparative HPLC]</ref>▼
Olenevalt kasutatavast statsionaarse faasi või liikuva faasi tüübist lahutatakse ained erineval viisil ja vastavalt sellele eristatakse järgmisi meetodeid (ja meetodite modifikatsioone):
*Vedelik-vedelikkromatograafia põhimõttel töötavad HPLC-süsteemid, kus nii statsionaarne kui ka liikuv faas on omavahel segunematud vedelfaasid ning eraldatavad ühendid jaotuvad nende faaside vahel:
**[[Normaalfaasiline kõrgsurvevedelikkromatograafia]], kus polaarne statsionaarne faas on [[silikageel]] ja liikuv faas on mittepolaarne. Selle meetodi üks modifikatsioone on hüdrofiilne interaktsioonikromatograafia (''hydrophilic interaction liquid chromatography'', HILIC), kus polaarse statsionaarse faasi külge on seotud hüdrofiilsed [[Dioolid|diool]]-, [[Amiinid|amino]]- või [[Amiidid|amiidrühmad]] ning liikuv faas sisaldab väikeses koguses vett.<ref name="Niessner, 2017"
**[[Pöördfaasiline kõrgsurvevedelikkromatograafia]] (''reversed-phase'' HPLC, RP-HPLC), kus mittepolaarne statsionaarne faas on silikageel, mille külge on keemiliselt seotud [[alküülrühm]]ad, ning liikuv faas on polaarne.<ref name="Niessner, 2017"
**[[Kiraalsus|Kiraalne]] kõrgsurvevedelikkromatograafia, kus kasutatakse [[enantiomeer]]ide lahutamiseks kiraalset liikuvat või liikumatut faasi.<ref
**Ultraefektiivne vedelikkromatograafia (''ultra-performance liquid chromatography'', UPLC), kus tänu väga peenetele teradele ja kolonni väiksemale läbimõõdule on võimalik lahutada ka ainesegusid, milles on väga palju eri ühendeid.<ref
*[[Ioonivahetuskromatograafia]]l põhinevas HPLC-süsteemis on statsionaarne faas tahke polüelektrolüüt ([[iooniidid|ioniit]]), mille ioonsed funktsionaalrühmad interakteeruvad proovis olevate vastasmärgilise laenguga [[ioon]]idega. Seotud ioonid elueeritakse, muutes liikuva faasi soolasisaldust või [[Vesinikeksponent|pH]]-d.<ref name="Niessner, 2017"
*[[Suurus-eraldus-kromatograafia]]l (''size-exclusion chromatography'', SEC) põhinevas HPLC-süsteemis kasutatakse statsionaarse faasina poorset geeli, millest lahuses olevad molekulid väljuvad vastavalt suurusele. Eristatakse geelfiltratsioonkromatograafiat, milles kasutatakse läbivoolutamiseks vesilahust, ja geelkromatograafiat (GPC), milles liikuv faas on orgaaniline lahusti.
*[[Afiinsuskromatograafia|Afiinsuskromatograafial]] põhinev HPLC (''high-performance liquid affinity chromatography'', HPLAC) on meetod, milles eraldatavad ained seonduvad esmalt kolonni täidisega seotud [[Ligand (biokeemia)|ligand]]iga ning elueeritakse seejärel kolonnist.<ref name="Niessner, 2017"
==Kõrgsurvevedelikkromatograafia aparatuur==
62. rida ⟶ 61. rida:
==Viited==
{{viited
<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref>
<ref name="c2tyk">[https://www.chromacademy.com/hplc-training.html CHROMacademy]</ref>
▲<ref name="BHRfe">[http://www.chromatographyonline.com/introduction-preparative-hplc-0 Chromatographyonline preparative HPLC]</ref>
<ref name="DxK8S">[http://www.chromatographyonline.com/micellar-liquid-chromatography-how-start-1 Chromatographyonline MLC]</ref>
<ref name="P9VE9">[https://www.chromatographytoday.com/news/preparative/33/breaking-news/an-introduction-to-chiral-chromatography/31907 Chromatographytoday chiral HPLC]</ref>
<ref name="lD3es">[https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1044030505009116 ScienceDirect UPLC]</ref>
}}
==Vaata ka==
| |||