Kõrgsurvevedelikkromatograafia: erinevus redaktsioonide vahel

'''Kõrgefektiivne vedelikkromatograafiaKõrgsurvevedelikkromatograafia''' ehk kõrgsurvevedelikkromatograafiakõrgefektiivne vedelikkromatograafia (''high-performance liquid chromatography'', HPLC) on [[kromatograafia|kromatograafiline]] meetod, kus kasutatakse [[statsionaarne faas|statsionaarse faasina]] kromatograafilise kolonni tahket peeneteralist täidist ning [[liikuv faas|liikuva faasina]] vedelikku ehk [[eluent]]i. Peeneteraline täidis põhjustab suurt takistust ning seetõttu kasutatakse eluendi kolonnist läbivoolutamiseks kõrgsurvepumpa.

Üks kõrgefektiivse vedelikkromatograafi tähtsamaid parameetreid on kolonni [[lahutusvõime]]. Mida pikem on kolonn ja peeneteralisem selle täidis, seda suurem on kolonni lahutusvõime, kuid seda kõrgem peab olema ka eluendile avaldatav surve. Tavalises kõrgefektiivses vedelikkromatograafias kasutatakse umbes 250-300 [[Baar(ühik)|baari]] suurust rõhku ning täidise terade suurus jääb vahemikku 3-5 μm. Uuemad kõrgsurvevedelikkromatograafid (nimetatakse ka ''ultra-performance liquid chromatography'', UPLC) võimaldavad lahutada komponente veelgi efektiivsemalt, kasutades väga peenete teradega täidiseid (1-2 μm) ja kõrgemat survet (kuni 1000 baari). Mõlemat tüüpi seadmeid kasutatakse selleks, et uurida nii kvantitatiivselt kui ka kvalitatiivselt segu koostisosasid ([[kromatograafiline analüüs]]), ning nende kolonni sisediameeter on umbes 4,6 mm (UPLC puhul väiksem).<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref> <ref>[https://www.chromacademy.com/hplc-training.html CHROMacademy]</ref>

Kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat kasutatakse ka uuritava [[keemiline ühend|ühendi]] lahutamiseks teistest segu koostisosadest, et ühendit teatud hulgal koguda ([[preparatiivne kromatograafia]]). Sellisel juhul on täidise terad suuremad (üle 10 μm) ning kolonnide läbimõõt vähemalt kaks korda suurem (sisediameeter üle 10 mm).<ref>

*[[NormaalfaasilinePöördfaasiline kõrgsurvevedelikkromatograafia]], kus polaarne statsionaarne faas on silikageel ja liikuv faas on mittepolaarne. Selle meetodi üks modifikatsioone on hüdrofiilne interaktsioonikromatograafia (''hydrophilic interaction liquid chromatographyreversed-phase'' HPLC, HILICRP-HPLC), kus polaarsemittepolaarne statsionaarsestatsionaarne faasi külgefaas on seotudsilikageel, hüdrofiilsedmille diool-,külge amiino-on võikeemiliselt amiidrühmadseotud [[alküülrühm]]ad, ning liikuv faas sisaldabon väikeses koguses vettpolaarne.<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref> Pöördfaasilise HPLC üks modifikatsioone on [[Pindaktiivsed ained|mitselle]] sisaldava vesilahuse kasutamine liikuva faasina (''micellar liquid chromatography'', MLC).<ref>[http://www.chromatographyonline.com/micellar-liquid-chromatography-how-start-1 Chromatographyonline MLC]</ref>

*[[Pöördfaasiline kõrgsurvevedelikkromatograafiaIoonivahetuskromatograafia]]s (''reversed-phase''on HPLC,statsionaarne RP-HPLCfaas tahke polüelektrolüüt ([[iooniidid|ioniit]]), kusmille mittepolaarneioonsed statsionaarnefunktsionaalrühmad faasinterakteeruvad onproovis silikageel,olevate millevastasmärgilise külgelaenguga on[[ioon]]idega. keemiliseltSeotud seotudioonid alküülrühmadelueeritakse, ningmuutes liikuvliikuva faasfaasi onsoolasisaldust polaarnevõi [[Vesinikeksponent|pH]]-d.<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref> Pöördfaasilise HPLC üks modifikatsioone on [[Pindaktiivsed ained|mitselle]] sisaldava vesilahuse kasutamine liikuva faasina (''micellar liquid chromatography'', MLC).<ref>[http://www.chromatographyonline.com/micellar-liquid-chromatography-how-start-1 Chromatographyonline MLC]</ref>

*[[Afiinsuskromatograafia|Afiinsuskromatograafial põhinev HPLC]] (''high-performance liquid affinity chromatography'', HPLAC) on meetod, milles eraldatavad ained seonduvad esmalt kolonni täidisega seotud ligandiga[[Ligand (biokeemia)|ligand]]iga ning elueeritakse seejärel kolonnist.<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref>

Kolonnid valmistatakse enamasti [[Roostevaba teras|roostevabast terasest]], sisediameetriga 1–10 mm ja pikkusega 30–300 mm.

[[Detektor]] tuvastab [[molekul|molekulid]], mis kolonnist väljuvad, ja nende hulga, ning see võimaldab neid analüüsida nii [[kvantitatiivsed uurimismeetodid|kvantitatiivselt]] kui ka [[kvalitatiivsed uurimismeetodid|kvalitatiivselt]].

Arvuti kontrollib HPLC-süsteemi kõiki osasid ning võimaldab detektori signaali abil kindlaks teha proovi kõikide komponentide [[retentsiooniindeks|retentsiooniaja]] ([[kvalitatiivsed uurimismeetodid|kvalitatiivne analüüs)]] ning koguse ([[kvantitatiivsed uurimismeetodid|kvantitatiivne analüüs]]).

[https://books.google.ee/books?id=TbswDwAAQBAJ&pg=PA157&lpg=PA157&dq=preparative+hplc+column+inner+diameter&source=bl&ots=euYaWePrqp&sig=LYopZFUpvT_NA0Uayz6jBRAr9DE&hl=et&sa=X&ved=0ahUKEwipjMiQ4cDYAhXDkCwKHRcOB3c4ChDoAQhDMAY#v=onepage&q=preparative%20hplc%20column%20inner%20diameter&f=false/ Niessner, Organic Trace Analysis, 2017]