Erinevus lehekülje "Kõrgsurvevedelikkromatograafia" redaktsioonide vahel

resümee puudub
Märgis: Viidete kustutamine
Märgis: Viidete kustutamine
{{keeletoimeta}}
[[Pilt:HPLC apparatus.svg|pisi|HPLC aparatuuri ehitus skemaatiliselt, kus 1 – pudelid eluentidega, 2 – eluendi degasaator, 3 – gradientkraan, 4 – eluendi sisestamise nõu, 5 – kõrgsurvepump, 6 – kraan sisestamise asendis, 6’ – kraani laadimisasend, 7 – silmus, 8 – eelkolonn, 9 – kromatograafiline kolonn, 10 – detektor, 11 – andmete töötlemise seadearvuti, 12 – jääkide või fraktsiooni koguja.]]
 
'''Kõrgefektiivne vedelikkromatograafia''' ehk kõrgsurvevedelikkromatograafia (''high-performance liquid chromatography'', HPLC) on [[kromatograafia|kromatograafiline]] meetod, kus kasutatakse [[statsionaarne faas|statsionaarse faasina]] kromatograafilise kolonni tahket peeneteralist täidist ning [[liikuv faas|liikuva faasina]] vedelikku ehk [[eluent]]i. Peeneteraline täidis põhjustab suurt takistust ning seetõttu kasutatakse eluendi kolonnist läbivoolutamiseks kõrgsurvepumpa.
 
==Kõrgsurvevedelikkromatograafia aparatuur==
Kõrgsurvevedelikkromatograafia aparatuur koosneb viiest põhilisest komponendist: pump, proovisisestussüsteemsisesti, kolonn, detektor ning juhtarvutiarvuti.
===Pump===
Pumba eesmärk on liikuv faas kindlal voolukiirusel läbi kromatograafi suruda. Keskmine voolukiirus HPLC süsteemis on 1–2 ml/min. Tavaliselt kasutatakse pumpasid, mis võimaldavad avaldada hüdraulilist rõhku kuni 600 [[baar (ühik)|baari]]. Pumbad võimaldavad teha nii isokraatilist elueerimist (liikuva faasi koostis analüüsi käigus ei muutu) kui ka gradientelueerimist (liikuva faasi koostis muutub analüüsi käigus). Isokraatiline pump on kõige soodsam, kuid teda kasutades peavad [[lahusti|lahustid]] olema eelnevalt segatud. Gradientpumbad on kallimad, kuid tänu nende omadusele ise lahusteid segada, saab neid kasutada ka gradientelueerimiseks.
Sisesti ehk injektor peab vastu pidama kõrgele survele. Väike kogus (tavaliselt 3-100 µl) proovi süstitakse süstlaga läbi spetsiaalse vaheseina või silmuse liikuvasse faasi. Kui on vaja analüüsida suurt hulka proove, siis on asendamatu automaatsisesti (''autosampler''), mille abil on võimalik analüüsida üksteise järel kuni mitusada proovi.
===Kolonn===
Kolonn on kromatograafias väga oluline komponent, sest temas lahutuvad proovi koostisosad. HPLC kolonnid on väikese läbimõõduga ning täidetud peenetest teradest koosneva maatriksiga. Et nendest omadustest tulenevat takistust ületada, peab liikuvat faasi läbi kolonni suruma kõrgsurvepumba abil.
Kolonn ja selle omadused on kõige suurem erinevus normaalfaaskromatograafia ja pöördfaaskromatokraafia vahel. Kolonni kutsutakse ka „kromatograafi südameks“<ref name="book">L.R. Snyder, J.J. Kirkland, J.L. Glaych, "Practical HPLC Method Development"(1997), 2nd ed., ISBN 978-0-471-00703-6</ref> ning see eraldab proovi komponendid. Kolonni täidisosakesed (mis normaalfaasi puhul on polaarsed ja pöördfaasi puhul on mittepolaarsed) põhjustavad normaalsetel voolukiirustel vastusurvet. Pump peab mobiilset faasi suruma läbi kolonni ja see tekitab kolonnis kõrget survet.
Kolonnid valmistatakse enamasti roostevabast terasest, sisediameetriga 2–4,61–10 mm. Pikkusja enamastipikkusega 10–3030–300 cmmm. <ref name="book" /><ref name="basics" />
===Detektor===
Detektor tuvastab [[molekul|molekulid]] jamis nendekolonnist hulgaväljuvad, misja kolonnistnende väljuvadhulga, ning sellesee järgivõimaldab saabneid teostadaanalüüsida nii [[kvantitatiivsed uurimismeetodid|kvantitatiivsetkvantitatiivselt]] analüüsikui ka [[kvalitatiivsed uurimismeetodid|kvalitatiivselt]].
===Arvuti/andmehõivesüsteem===
KontrollibArvuti kontrollib HPLC süsteemi kõiki osasid. Arvutining võimaldab detektori signaali abil kindlaks teha proovi kõikide komponentide [[retentsiooniindeks|retentsiooniaja]] ([[kvalitatiivsed uurimismeetodid|kvalitatiivne analüüs)]] [[retentsiooniindeks|retentsiooniaja]] ning koguse (kvantitatiivne analüüs).<ref name="basics" />
 
==Viited==
290

muudatust