Kasutaja:Kj19/Dna kloneerimine: erinevus redaktsioonide vahel
Eemaldatud sisu Lisatud sisu
Resümee puudub |
Resümee puudub |
||
41. rida:
Genoomse DNA kloonimiseks tuleb esmalt eraldada kloonitav DNA huvipakkuvast organismist. Põhimõtteliselt sobib selleks ükskõik milline koeproov (isegi [[väljasuremine|väljasurnud]] organismi oma<ref name="pmid6504142">{{cite journal |author=Higuchi R, Bowman B, Freiberger M, Ryder OA, Wilson AC |title=DNA sequences from the quagga, an extinct member of the horse family |journal=Nature |volume=312 |issue=5991 |pages=282–4 |year=1984 |pmid=6504142 |doi= 10.1038/312282a0|url=}}</ref>) senikaua, kuni DNA pole ulatuslikult [[degradatsioon|degradeerunud]]. DNA puhastatakse lihtsate meetoditega, et eraldada kontamineerivad valgud (fenooliga [[ekstraktsioon|ekstraheerimine]], RNA (ribonukleaasidega töötlemine) ja muud väiksemad molekulid ([[kromatograafia]]). Puhastatud DNA molekul amplifitseeritakse, kasutades [[PCR]] reaktsiooni.
Puhastatud DNA molekule töödeldakse samade restriktaasidega, millega eelnevalt töödeldi vektor-DNA-d, et saada komplementaarsed otsad DNA-de liitumiseks. Vajadusel lisatakse kloonitava ahela otsa lühikesed kaheahelalised restriktsioonisaite sisaldavad DNA lõigud (''linkerid''), mis on vajalikud vektor-DNA-ga liitumisel.<ref name="isbn1-4051-1121-6" /><ref name="isbn0-87969-576-5" />
===Rekombinantse DNA sünteesimine ligatsiooni abil===
| |||