Erinevus lehekülje "Kõrgsurvevedelikkromatograafia" redaktsioonide vahel

P
pisitoimetamine
P (Korrastasin skripti abil viiteid)
P (pisitoimetamine)
 
[[Pilt:HPLC apparatus.svg|pisi|HPLC aparatuuri skemaatiline ehitus, kus 1 – pudelid eluentidega,
2 – eluendi degasaator,
 
3 – gradientkraan,
 
4 – eluendi sisestamise nõu,
 
5 – kõrgsurvepump,
 
6 – kraan sisestamise asendis,
 
6’ – kraani laadimisasend,
 
7 – silmus,
 
8 – eelkolonn,
 
9 – kromatograafiline kolonn,
 
10 – detektor,
 
11 – arvuti,
 
12 – jääkide või fraktsiooni koguja.
]]
 
'''Kõrgsurvevedelikkromatograafia''' ehk kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (''high-performance liquid chromatography'', HPLC) on [[kromatograafia|kromatograafiline]] meetod, kus kasutatakse [[statsionaarne faas|statsionaarse faasina]] kromatograafilise kolonni tahket peeneteralist täidist ning [[liikuv faas|liikuva faasina]] vedelikku ehk [[eluent]]i. Peeneteraline täidis põhjustab suurt takistust ning seetõttu kasutatakse eluendi kolonnist läbivoolutamiseks kõrgsurvepumpa.
 
Üks kõrgefektiivse vedelikkromatograafi tähtsamaid parameetreid on kolonni [[lahutusvõime]]. Mida pikem on kolonn ja peeneteralisem selle täidis, seda suurem on kolonni lahutusvõime, kuid seda kõrgem peab olema ka eluendile avaldatav surve. Tavalises kõrgefektiivses vedelikkromatograafias kasutatakse umbes 250–300 [[Baar(ühik)|baari]] suurust rõhku ning täidise terade suurus jääb vahemikku 3–5 μm. Uuemad kõrgsurvevedelikkromatograafid (nimetatakse ka ''ultra-performance liquid chromatography'', UPLC) võimaldavad lahutada komponente veelgi efektiivsemalt, kasutades väga peenete teradega täidiseid (1–2 μm) ja kõrgemat survet (kuni 1000 baari). Mõlemat tüüpi seadmeid kasutatakse selleks, et uurida nii kvantitatiivselt kui ka kvalitatiivselt segu koostisosasid ([[kromatograafiline analüüs]]), ning nende kolonni sisediameeter on umbes 4,6 &nbsp;mm (UPLC puhul väiksem).<ref name="Niessner, 2017" /> <ref name="c2tyk" />
 
Kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat kasutatakse ka uuritava [[keemiline ühend|ühendi]] lahutamiseks teistest segu koostisosadest, et ühendit teatud hulgal koguda ([[preparatiivne kromatograafia]]). Sellisel juhul on täidise terad suuremad (üle 10 μm) ning kolonnide läbimõõt vähemalt kaks korda suurem (sisediameeter üle 10 &nbsp;mm).<ref name="BHRfe" />
 
Olenevalt kasutatavast statsionaarse faasi või liikuva faasi tüübist lahutatakse ained erineval viisil ja vastavalt sellele eristatakse järgmisi meetodeid (ja meetodite modifikatsioone):
*[[Ioonivahetuskromatograafia]]l põhinevas HPLC-süsteemis on statsionaarne faas tahke polüelektrolüüt ([[iooniidid|ioniit]]), mille ioonsed funktsionaalrühmad interakteeruvad proovis olevate vastasmärgilise laenguga [[ioon]]idega. Seotud ioonid elueeritakse, muutes liikuva faasi soolasisaldust või [[Vesinikeksponent|pH]]-d.<ref name="Niessner, 2017" />
*[[Suurus-eraldus-kromatograafia]]l (''size-exclusion chromatography'', SEC) põhinevas HPLC-süsteemis kasutatakse statsionaarse faasina poorset geeli, millest lahuses olevad molekulid väljuvad vastavalt suurusele. Eristatakse geelfiltratsioonkromatograafiat, milles kasutatakse läbivoolutamiseks vesilahust, ja geelkromatograafiat (GPC), milles liikuv faas on orgaaniline lahusti.
*[[Afiinsuskromatograafia|Afiinsuskromatograafial]]l põhinev HPLC (''high-performance liquid affinity chromatography'', HPLAC) on meetod, milles eraldatavad ained seonduvad esmalt kolonni täidisega seotud [[Ligand (biokeemia)|ligand]]iga ning elueeritakse seejärel kolonnist.<ref name="Niessner, 2017" />
 
==Kõrgsurvevedelikkromatograafia aparatuur==
 
===Pump===
Pumba eesmärk on liikuv faas kindlal voolukiirusel läbi kromatograafi suruda. Keskmine voolukiirus HPLC-süsteemis on 1–2 ml/min. Tavaliselt kasutatakse pumpasid, mis võimaldavad avaldada hüdraulilist rõhku kuni 600 [[baar (ühik)|baari]]. Pumbad võimaldavad teha nii isokraatilist elueerimist (liikuva faasi koostis analüüsi käigus ei muutu) kui ka gradientelueerimist (liikuva faasi koostis muutub analüüsi käigus). Isokraatiline pump on kõige soodsam, kuid teda kasutades peavad [[lahusti|lahustid]]d olema eelnevalt segatud. Gradientpumbad on kallimad, kuid tänu nende omadusele ise lahusteid segada, saab neid kasutada ka gradientelueerimiseks.
 
===Sisesti===
===Kolonn===
Kolonn on kromatograafias väga oluline komponent, sest temas lahutuvad proovi koostisosad. HPLC kolonnid on väikese läbimõõduga ning täidetud peenetest teradest koosneva maatriksiga. Et nendest omadustest tulenevat takistust ületada, peab liikuvat faasi kõrgsurvepumba abil läbi kolonni suruma.
Kolonnid valmistatakse enamasti [[Roostevaba teras|roostevabast terasest]], sisediameetriga 1–10 &nbsp;mm ja pikkusega 30–300 &nbsp;mm.
 
===Detektor===
[[Kromatograafia detektor]] tuvastab [[molekul|molekulid]]id, mis kolonnist väljuvad, ja nende hulga, ning see võimaldab neid analüüsida nii [[kvantitatiivsed uurimismeetodid|kvantitatiivselt]] kui ka [[kvalitatiivsed uurimismeetodid|kvalitatiivselt]].
 
===Arvuti===
*[[Kromatograafia]]
*[[Vedelikkromatograafia-massispektromeetria]]
 
[[Kategooria:Labor]]
[[Kategooria:Kromatograafia]]
 
==Välislingid==
 
[https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1044030505009116 UPLC on ScienceDirect]
 
[[Kategooria:Labor]]
[[Kategooria:Kromatograafia]]
75 879

muudatust