Erinevus lehekülje "Kõrgsurvevedelikkromatograafia" redaktsioonide vahel

resümee puudub
'''Kõrgsurvevedelikkromatograafia''' ehk kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (''high-performance liquid chromatography'', HPLC) on [[kromatograafia|kromatograafiline]] meetod, kus kasutatakse [[statsionaarne faas|statsionaarse faasina]] kromatograafilise kolonni tahket peeneteralist täidist ning [[liikuv faas|liikuva faasina]] vedelikku ehk [[eluent]]i. Peeneteraline täidis põhjustab suurt takistust ning seetõttu kasutatakse eluendi kolonnist läbivoolutamiseks kõrgsurvepumpa.
 
Üks kõrgefektiivse vedelikkromatograafi tähtsamaid parameetreid on kolonni [[lahutusvõime]]. Mida pikem on kolonn ja peeneteralisem selle täidis, seda suurem on kolonni lahutusvõime, kuid seda kõrgem peab olema ka eluendile avaldatav surve. Tavalises kõrgefektiivses vedelikkromatograafias kasutatakse umbes 250-300250–300 [[Baar(ühik)|baari]] suurust rõhku ning täidise terade suurus jääb vahemikku 3-53–5 μm. Uuemad kõrgsurvevedelikkromatograafid (nimetatakse ka ''ultra-performance liquid chromatography'', UPLC) võimaldavad lahutada komponente veelgi efektiivsemalt, kasutades väga peenete teradega täidiseid (1-21–2 μm) ja kõrgemat survet (kuni 1000 baari). Mõlemat tüüpi seadmeid kasutatakse selleks, et uurida nii kvantitatiivselt kui ka kvalitatiivselt segu koostisosasid ([[kromatograafiline analüüs]]), ning nende kolonni sisediameeter on umbes 4,6 mm (UPLC puhul väiksem).<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref> <ref>[https://www.chromacademy.com/hplc-training.html CHROMacademy]</ref>
 
Kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat kasutatakse ka uuritava [[keemiline ühend|ühendi]] lahutamiseks teistest segu koostisosadest, et ühendit teatud hulgal koguda ([[preparatiivne kromatograafia]]). Sellisel juhul on täidise terad suuremad (üle 10 μm) ning kolonnide läbimõõt vähemalt kaks korda suurem (sisediameeter üle 10 mm).<ref>
Pumba eesmärk on liikuv faas kindlal voolukiirusel läbi kromatograafi suruda. Keskmine voolukiirus HPLC-süsteemis on 1–2 ml/min. Tavaliselt kasutatakse pumpasid, mis võimaldavad avaldada hüdraulilist rõhku kuni 600 [[baar (ühik)|baari]]. Pumbad võimaldavad teha nii isokraatilist elueerimist (liikuva faasi koostis analüüsi käigus ei muutu) kui ka gradientelueerimist (liikuva faasi koostis muutub analüüsi käigus). Isokraatiline pump on kõige soodsam, kuid teda kasutades peavad [[lahusti|lahustid]] olema eelnevalt segatud. Gradientpumbad on kallimad, kuid tänu nende omadusele ise lahusteid segada, saab neid kasutada ka gradientelueerimiseks.
===Sisesti===
Sisesti ehk injektor peab vastu pidama kõrgele survele. Väike kogus (tavaliselt 3-1003–100 µl) proovi süstitakse süstlaga läbi spetsiaalse vaheseina või silmuse liikuvasse faasi. Kui on vaja analüüsida suurt hulka proove, siis on asendamatu automaatsisesti (''autosampler''), mille abil on võimalik analüüsida üksteise järel kuni mitusada proovi.
===Kolonn===
Kolonn on kromatograafias väga oluline komponent, sest temas lahutuvad proovi koostisosad. HPLC kolonnid on väikese läbimõõduga ning täidetud peenetest teradest koosneva maatriksiga. Et nendest omadustest tulenevat takistust ületada, peab liikuvat faasi kõrgsurvepumba abil läbi kolonni suruma.
Anonüümne kasutaja