Kõrgsurvevedelikkromatograafia: erinevus redaktsioonide vahel
Eemaldatud sisu Lisatud sisu
Resümee puudub |
Resümee puudub |
||
4. rida:
'''Kõrgefektiivne vedelikkromatograafia''' ehk kõrgsurvevedelikkromatograafia (''high-performance liquid chromatography'', HPLC) on [[kromatograafia|kromatograafiline]] meetod, kus kasutatakse [[statsionaarne faas|statsionaarse faasina]] kromatograafilise kolonni tahket peeneteralist täidist ning [[liikuv faas|liikuva faasina]] vedelikku ehk [[eluent]]i. Peeneteraline täidis põhjustab suurt takistust ning seetõttu kasutatakse eluendi kolonnist läbivoolutamiseks kõrgsurvepumpa.
Üks kõrgefektiivse vedelikkromatograafi tähtsamaid parameetreid on kolonni [[lahutusvõime]]. Mida pikem on kolonn ja peeneteralisem selle täidis, seda suurem on kolonni lahutusvõime, kuid seda kõrgem peab olema ka eluendile avaldatav surve. Tavalises kõrgefektiivses vedelikkromatograafias kasutatakse umbes 250-300 baari suurust rõhku ning täidise terade suurus jääb vahemikku 3-5 μm. Uuemad kõrgsurvevedelikkromatograafid (nimetatakse ka ''ultra-performance liquid chromatography'', UPLC) võimaldavad lahutada komponente veelgi efektiivsemalt, kasutades väga peenete teradega täidiseid (1-2 μm) ja kõrgemat survet (kuni 1000 baari). Mõlemat tüüpi seadmeid kasutatakse selleks, et uurida nii kvantitatiivselt kui ka kvalitatiivselt segu koostisosasid ([[kromatograafiline analüüs]]), ning nende kolonni sisediameeter on umbes 4,6 mm (UPLC puhul väiksem).<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref> <ref>[https://www.chromacademy.com/hplc-training.html CHROMacademy]</ref>
Kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat kasutatakse ka uuritava ühendi lahutamiseks teistest segu koostisosadest, et ühendit teatud hulgal koguda ([[preparatiivne kromatograafia]]). Sellisel juhul on täidise terad suuremad (üle 10 μm) ning kolonnide läbimõõt vähemalt kaks korda suurem (sisediameeter üle 10 mm).<ref>▼
[http://www.chromatographyonline.com/introduction-preparative-hplc-0 Chromatographyonline preparative HPLC]</ref>
▲Kõrgefektiivset vedelikkromatograafiat kasutatakse ka uuritava ühendi lahutamiseks teistest segu koostisosadest, et ühendit teatud hulgal koguda ([[preparatiivne kromatograafia]]). Sellisel juhul on täidise terad suuremad (üle 10 μm) ning kolonnide läbimõõt vähemalt kaks korda suurem (sisediameeter üle 10 mm).
Olenevalt kasutatavast [[statsionaarne faas|statsionaarse faasi]] või [[liikuv faas|liikuva faasi]] tüübist lahutatakse ained erineval viisil ja vastavalt sellele eristatakse järgmisi meetodeid (ja meetodite modifikatsioone):
*[[Normaalfaasiline kõrgsurvevedelikkromatograafia]], kus polaarne statsionaarne faas on silikageel ja liikuv faas on mittepolaarne. Selle meetodi üks modifikatsioone on hüdrofiilne interaktsioonikromatograafia (''hydrophilic interaction liquid chromatography'', HILIC), kus polaarse statsionaarse faasi külge on seotud hüdrofiilsed diool-, amiino- või amiidrühmad ning liikuv faas sisaldab väikeses koguses vett.<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref>
*[[Pöördfaasiline kõrgsurvevedelikkromatograafia]] (''reversed-phase'' HPLC, RP-HPLC), kus mittepolaarne statsionaarne faas on silikageel, mille külge on keemiliselt seotud alküülrühmad, ning liikuv faas on polaarne.<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref> Pöördfaasilise HPLC üks modifikatsioone on [[Pindaktiivsed ained|mitselle]] sisaldava vesilahuse kasutamine liikuva faasina (''micellar liquid chromatography'', MLC).<ref>[http://www.chromatographyonline.com/micellar-liquid-chromatography-how-start-1 Chromatographyonline MLC]</ref>
*[[Ioonivahetuskromatograafia]]s on statsionaarne faas tahke polüelektrolüüt ([[iooniidid|ioniit]]), mille ioonsed funktsionaalrühmad interakteeruvad proovis olevate vastasmärgilise laenguga ioonidega. Seotud ioonid elueeritakse, muutes liikuva faasi soolasisaldust või pH-d.<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref>
*[[Suurus-eraldus-kromatograafia]]s (''size-exclusion chromatography'', SEC) kasutatakse statsionaarse faasina poorset geeli, millest lahuses olevad molekulid väljuvad vastavalt suurusele. Eristatakse geelfiltratsioonkromatograafiat, milles kasutatakse läbivoolutamiseks vesilahust ja geelkromatograafiat (GPC), milles liikuv faas on orgaaniline lahusti.
*[[Afiinsuskromatograafia|Afiinsuskromatograafial põhinev HPLC]] (''high-performance liquid affinity chromatography'', HPLAC) on meetod, milles eraldatavad ained seonduvad esmalt kolonni täidisega seotud ligandiga ning elueeritakse seejärel kolonnist.<ref name="Niessner, 2017">Niessner, R., Schäffer, A.. ''Organic Trace Analysis'', Walter De Gruyter GmbH, 2017, Google'i raamat (inglise keeles)</ref>
*[[Kiraalsus|Kiraalne]] kõrgsurvevedelikkromatograafia, kus kasutatakse [[enantiomeer]]ide lahutamiseks kiraalset liikuvat või liikumatut faasi.<ref>[https://www.chromatographytoday.com/news/preparative/33/breaking-news/an-introduction-to-chiral-chromatography/31907 Chromatographytoday chiral HPLC]</ref>
*Ultraefektiivne vedelikkromatograafia (''ultra-performance liquid chromatography'', UPLC), kus tänu väga peenetele teradele ja kolonni väiksemale läbimõõdule on võimalik lahutada ka ainesegusid, milles on väga palju eri ühendeid.<ref>[https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1044030505009116 ScienceDirect UPLC]</ref>
==Kõrgsurvevedelikkromatograafia aparatuur==
26. rida ⟶ 28. rida:
Kolonn on kromatograafias väga oluline komponent, sest temas lahutuvad proovi koostisosad. HPLC kolonnid on väikese läbimõõduga ning täidetud peenetest teradest koosneva maatriksiga. Et nendest omadustest tulenevat takistust ületada, peab liikuvat faasi kõrgsurvepumba abil läbi kolonni suruma.
Kolonnid valmistatakse enamasti roostevabast terasest, sisediameetriga 1–10 mm ja pikkusega 30–300 mm.
===Detektor===
Detektor tuvastab [[molekul|molekulid]], mis kolonnist väljuvad, ja nende hulga, ning see võimaldab neid analüüsida nii [[kvantitatiivsed uurimismeetodid|kvantitatiivselt]] kui ka [[kvalitatiivsed uurimismeetodid|kvalitatiivselt]].
===Arvuti===
Arvuti kontrollib HPLC-süsteemi kõiki osasid ning võimaldab detektori signaali abil kindlaks teha proovi kõikide komponentide [[retentsiooniindeks|retentsiooniaja]] ([[kvalitatiivsed uurimismeetodid|kvalitatiivne analüüs)]] ning koguse ([[kvantitatiivsed uurimismeetodid|kvantitatiivne analüüs]]).
57. rida:
[https://www.sciencedirect.com/topics/biochemistry-genetics-and-molecular-biology/high-performance-liquid-chromatography/ HPLC on ScienceDirect]
[https://www.chromatographytoday.com/news/preparative/33/breaking-news/an-introduction-to-chiral-chromatography/31907 Chromatography today]
[https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1044030505009116 UPLC on ScienceDirect]
| |||