Fluorestsentsspektroskoopia: erinevus redaktsioonide vahel

Eemaldatud sisu Lisatud sisu
PResümee puudub
P kasutakse > kasutatakse
16. rida:
==Seadmed==
Kasutatakse kahte tüüpi seadmeid:
* Filterfluorimeetritesfilterfluorimeetrites kasutaksekasutatakse [[valgusfilter|valgusfiltreid]], et eristada ergastamiseks kasutatud valgust ja fluorestseerunud kiirgust.;
* Spektrofluorimeetritesspektrofluorimeetrites kasutatakse [[difraktsioonivõre]]dega [[monokromaator]]eid, et eristada ergastamiseks kasutatud valgust ja fluorestseerunud kiirgust.<ref name="Sharma"> Introduction to Fluorescence Spectroscopy. Sharma, A. ja Schulman, S. G. Wiley interscience, 1999</ref>
 
[[File:Fluorimeter.svg|thumb|right|Fluorimeetri lihtsustatud skeem. λex tähistab ergastava valguse lainepikkust ja λem ainest kiiratud valguse lainepikkust.]]
 
Mõlemat tüüpi seadmed kasutavad järgnevatjärgmist skeemi. Valgusallikalt pärinev valgus suunatakse läbi filtri või [[monokromaator]]i uuritavale ainele. Osa pealelangenud valgusest neeldub ja mingi hulk molekule kiirgab fluorestsentkiirgust. Sellel kiirgusel ei ole eelissuunda, st see võib olla kiiratud ükskõik millisesse suunda. Osa tekkinud kiirgusest läheb läbi järgmise filtri või [[monokromaator]]i, mille taga on [[fluorestsents]]i registreeriv detektor. Viimane on ainele pealelangeva valgusega üldjuhul 90° nurga all, et vedelike uurimisel vältida ergastava valguse sattumist detektorisse, lisaks on nii tehniliselt lihtsam. Kuna ergastatav valgus on üldjuhul intensiivne ja detektor väga tundlik, siis on eelnev vajalik detektori töökorras hoidmiseks. Kasutatud on ka [[lääts]]i ja peegleid ning erinevatel fluorimeetritel võib esineda mitmesuguseid modifikatsioone.<ref name="Sharma" />
 
Kasutust leiavad erinevaid valgusallikaid, sealhulgas [[laser]]id, [[LED]]id, [[ksenoonlamp|ksenoon-]] ja [[elavhõbelamp|elavhõbelambid]]. Ergastava valgusena kasutatakse sellist kiirgust, mis neeldub tugevalt uuritavas aines. Seda on lihtne leida [[neeldumisspekter|neeldumisspektrist]]. Laserid kiirgavad väga [[monokromaatiline laine|monokromaatset valgust]], mistõttu pole vajadust ergastavat valgust enne ainega interakteerumist läbi filtri või [[monokromaator]]i lasta. Laserite kasutamise puuduseks on aga asjaolu, et neilt pärineva valguse lainepikkust ei saa muuta. Seevastu [[ksenoonlambi]] spekter on pidev ja temalt pärineva valguse intensiivsus püsib enam-vähem konstantsena lainepikkuste vahemikus 300 kuni 800300–800 nm.<ref name="ksenoon"> {{netiviide | URL =http://www.hamamatsu.com/resources/pdf/etd/Xe-HgXe_TLSX1044E05.pdf| Pealkiri =Super-Quiet Xenon Lamp. Super-Quiet Mercury-Xenon Lamp| Kasutatud =21.10.14 | Keel = }} </ref>
 
Valgusfiltreid on erinevat tüüpi, kuid põhimõte on neil sama – teatud lainepikkusega valgus neelatakse (mitte alati täielikult), muu lastakse läbi. [[Monokromaator]]isse sisenenud valgusest jäetakse difraktsioonivõrede abil alles ainult teatud lainepikkusega valgus. Läbiva valguse lainepikkust saab muuta, kuid tuleb arvestada, et tegelikult laseb monokromaator läbi mingit kitsast lainepikkuste vahemikku ja lisaks sellele ka mingil määral parasiitvalgust, mis on soovitust erineva lainepikkusega.<ref name="Sharma" />
29. rida:
Detektorid on kas ühe- või mitmekanalilised. Ühe kanaliga detektoriga saab registreerida kiirguse intensiivsust ainult ühe lainepikkuse kaupa, samas mitmekanaliline salvestab terve spektri korraga ja kiirguva valguse jaoks pole [[monokromaator]]it vajagi. Mõlemal variandil on siiski omad eelised ja puudused.<ref name="CCD"> {{netiviide | URL =http://www.horiba.com/us/en/scientific/products/raman-spectroscopy/raman-academy/raman-faqs/what-is-a-ccd-detector/| Pealkiri = What is a CCD detector?| Kasutatud =28.10.14 | Keel = }} </ref>
 
[[Küvett]] on anum, mille sees analüüsitavat ainet hoitakse. Tuleb hoolega jälgida, millised on küveti enda optilised omadused, et ei juhtuks olukord, kus küvett ei lase ergastavat valgust läbi või küveti enda [[fluorestsents]] on tunduvalt parem kui uuritaval ainel. Eelistatud on [[kvarts]]ist küvetid, mis lasevad valgust läbi lainepikkuste vahemikus 200 kuni 2500200–2500 nanomeetrit (siinkohal oleks õigem rääkida mitte enam valgusest, vaid kiirgusest, sest nähtava valguse [[diapasoon]] moodustab ainult väikse osa sellest vahemikust). Kallim ja kõrgema klassi [[kvarts]] laseb läbi kiirgust kuni 3500 nanomeetrit.<ref name="küvetid"> {{netiviide | URL =http://www.sigmaaldrich.com/analytical-chromatography/analytical-products.html?TablePage=104902943| Pealkiri = Quartz and Glass Cuvettes| Kasutatud =21.10.14 | Keel = }} </ref>
 
Mitmekülgseimad fluorimeetrid kahe [[monokromaator]]i ja pideva valgusallikaga suudavad mõõta nii ergastus- kui ka fluorestsentsspektri. Viimase mõõtmisel on ergastava valguse lainepikkus konstantne (eelistatavalt tugeva neeldumise piirkonnas) ja kiiratava valguse [[monokromaator]] skannib spektri. Ergastusspektri mõõtmisel töötavad monokromaatorid vastupidi, esimene skannib ja teine püsib konstantsena.<ref name="Sharma" /><ref name="Lakowicz">Principles of Fluorescence Spectroscopy. Lakowicz, J. R. Plenum Publishers 1999 </ref>