Kloonimine: erinevus redaktsioonide vahel

Alguses tuleb eraldada DNAst sobiva suurusega lõik. Seejärel ligeerimise abil sisestatakse [[amplifitseeritud DNA]] [[vektor|vektorisse]] (DNA lõik). Vektor (mis on tavaliselt ümmargune) [[lineariseerimine|lineariseeritakse]], kasutades selleks [[restriktsiooniensüüm|restriktsiooniensüüme]]. Järgmisena inkubeeritakse vektor meid huvitava fragmendiga kindlates tingimustes koos [[ensüüm|ensüümi]] DNA ligaasiga. Pärast ligeerimist siseneb vektor meid huvitava DNA lõiguga [[peremeesrakk|peremeesrakku]]. Esineb ka teisi võimalikke tehnikaid, näiteks [[elektroporatsioon]]<ref name="pmid2659971">{{cite journal |author=Wirth R, Friesenegger A, Fiedler S |title=Transformation of various species of gram-negative bacteria belonging to 11 different genera by electroporation |journal=Mol. Gen. Genet. |volume=216 |issue=1 |pages=175–7 |year=1989 |month=MarchMärts |pmid=2659971 |doi= 10.1007/BF00332248|url=}}</ref>, [[optiline süstimine]] ja [[DNA-püss|DNA-püssi]] abil. Lõpuks saadud [[transformatsioon|transformeeritud]] rakud pannakse kasvama. Olenemata millist sisestamismeetodit kasutati, on võõr-DNA rakku sisenemine väikese efektiivsusega. Ainult teatud väike osa rakkudest võtab võõr-DNA oma koosseisu. Selleks, et kindlaks teha, millised rakud on edukalt kloonitud, kasutatakse vektorisse ehitatud [[markergeen|markergeene]]. Kaasaegsed kloonimisvektorid sisaldavad valikulisi [[antibiootiku|antibiootikumiresistentsusmarkereid]], mis võimaldavad söötmel kasvada ainult nendel rakkudel, milles on see vektor olemas.<ref name="isbn1-4051-1121-6">{{cite book |author=Brown, Terry |title=Gene cloning and DNA analysis: an introduction |publisher=Blackwell Pub |location=Cambridge, MA |year=2006 |pages= |isbn=1-4051 -1121-6 |oclc= |doi= |accessdate=}}</ref>

Kahjuks suure surve tõttu nii munarakule kui ka siirdatavale tuumale läheb palju rakke kaduma protsessi käigus. Siiamaani pole võimalik seda protseduuri [[automatiseerima|automatiseerida]], kõike tuleb käsitsi mikroskoobi all teostada, mille tõttu on see protseduur väga ressursimahukas. [[biokeemia|Biokeemiaga]] seotud erinevate keharakutuumade ümberprogrammeerimine ning munaraku aktiveerimine pole samuti kaugeltki hästi arusaadavad protsessid.<ref name=Campbell>{{cite journal |author=Campbell KH, McWhir J, Ritchie WA, Wilmut I |title=Sheep cloned by nuclear transfer from a cultured cell line |journal=Nature |volume=380 |issue=6569 |pages=64–6 |year=1996 |month=MarchMärts |pmid=8598906 |doi=10.1038/380064a0 |url=}}</ref>