Erinevus lehekülje "Transformatsioon (geneetika)" redaktsioonide vahel

resümee puudub
===Loomad===
 
Loomad
DNA viimist loomsetesse rakkudesse nimetatakse harilikult transfekrsiooniks. Ka sel puhul muudetakse rakusein erinevate võtete abil auklikuks, et soovitud materjal rakku liikuda saaks. Transfektsioon ei tähenda ainult DNA viimist rakku, selleks võib olla näiteks siRNA konstrukt või valk nagu antikeha. Transfekteerimiseks kasutatakse kaltsiumfosfaati, elektroporatsiooni või segatakse rakku viidav aine katioonsete lipiididega moodustamaks liposoome, mis membraaniga kokku sulades sisaldise rakku viivad.
 
 
==Praktilisi kylgi molekulaarbioloogias==
 
 
Kunstliku kompetentsuse tekitamine bakterites annab hea võimaluse DNAga manipuleerimiseks ja valkude ekspressiooniks. Levinuimaks
mudelorganismiks on Escherichia coli, keda enamasti plasmiididega transformeeritakse. Plasmiidsel DNA-l peab rakku pysimajäämiseks olema oma
replikatsiooni alguspunkt, et teda genoomist sõltumatult paljundada saaks.
Transformatsiooniefektiivsuse ehk tõhususe, millega töödeldud bakterid väliskeskkonnast DNA-d yles korjavad, mõõtyhikuks on CFU/μg DNA kohta.
CFU ehk colony forming units väljendab eluvõimeliste rakkude hulka näites milliliitris lahuses. Väikese plasmiidi nagu pUC19 puhul tähendab transformatsiooniefektiivsus 1x108 cfu/μg seda, et umbes 1 plasmiid 2000 hulgast läheb rakku sisse.
Keemiliste kompetentide puhul hoitakse rakke jää peal kylmas CaCl2 lahuses, muutes rakud plasmiidsele DNA-le läbitavaks. Rakke inkubeeritakse jääl plasmiidi juuresolekul ja seejärel kuumutatakse 42°C juures sõltuvalt metoodikast 30-120 sekundit. Mittetööstuslikud meetodid annavad tulemuseks
keskmiselt 106 - 107 transformanti mikrogrammi plasmiidi kohta. Keemiline meetod toimib rõngasja DNA puhul väga hästi, kuid ei kõlba lineaarsete DNA fragmentide tarvis, arvatavasti seetõttu, et raku eksonukleaasid lagundavad lineaarse DNA kiiresti ära. Looduslikud kompetendid seevastu transformeeruvad lineaarse DNA-ga paremini kui plasmiidsega.
 
<references/>
28

muudatust